벡터의 종류
1. BEVS의 종류
◈ Baculovirus 벡터는 크게 두가지 형태로 나뉘어진다.
목적하는 단백질이 완전히 독립된 형태로 발현되는 비융합벡터 (non-fusion vector)와 목적 단백질이 다각체 단백질 또는 다른 단백질의 일부와 융합되어 발현되는 융합벡터 (fusion vector)가 있다.
일반적으로 가장 많이 이용되는 형태는 비융합 발현벡터로 단백질 발현 후 비교적 간단하게 목적하는 산물만을 얻을 수 있기 때문이다. 반면 융합 발현벡터의 경우에는 벡터제작이 어렵고, 목적 단백질의 정제에도 다소 번거로운 점은 있으나 비융합 벡터에 의한 것 보다 목적 단백질의 발현양이 훨씬 많은 특징이 있다. 아직 그 정확한 원인은 밝혀지지 않았으나 원래 그 프로모터가 작용하는 유전자 (다각체 단백질 유전자 등)의 일부를 남겨두고 벡터를 제작하여 목적 단백질이 이와 융합된 상태로 발현될 경우, 그렇지 않은 경우보다 높은 발현효율을 보인다고 알려져 있다. 이는 프로모터가 유전자에 작용할 때 알려지지 않은 어떤 인자가 존재함을 지적해주는 것으로 추정된다.
2. 비융합 발현 벡터
1) 다각체 단백질 유전자가 제거된 형태들
◈ 다각체 단백질 유전자만 제거된 형태
◈ 다각체 단백질 프로모터에 변이를 일으켜 발현효율을 더 높인 형태
◈ 표지 유전자가 존재하는 형태
◈ 이중 프로모터를 이용하는 형태
2) 다각체 단백질 유전자가 존재하는 형태
◈ 이중 다각체 단백질 유전자 프로모터 이용
◈ p10 프로모터 이용
2) 융합 발현 벡터
기본적으로는 위의 벡터들과 동일한 구조를 이룰 수 있으며 단지 프로모터뒤에 원래의 유전자 또는 signal peptide 등이 일부 존재할 뿐이다.
◈ 기본적 형태
◈ 단백질 절단 인식부위 존재형태
◈ 세포외 분비를 촉진시키는 분비신호(signal)를 가진 형태
3) 일시적 발현 벡터 (transient expression vector)
재조합 바이러스의 제작 없이 바이러스의 초기발현 유전자 (immediate early gene)의 프로모터만 가진 형태로 숙주세포의 발현도구를 이용하여 프로모터의 활성화가 가능함으로 세포내에 플라스미드 형태로 도입만 되면 발현될 수 있는 벡터
3. BEVS의 개량
◈ 위에 언급된 형태들은 기본적인 것만 나열한 것으로 여러 가지 제작의 편리성을 도모하기 위하여 수정을 가한 형태가 많이 존재한다.
그리고 최근에는 재조합 바이러스의 분리를 위해 전이벡터에 표지 유전자를 삽입하는 방법 외에 동시전이시에 사용되는 바이러스 전체 DNA에 수정을 가하여 분리의 편리성을 도모한 여러 가지 벡터계가 개발되어 있다.
바이러스 DNA를 절단하여 선상으로 만들고 절단된 부위가 전이벡터에 의해 복원될 때에만 바이러스가 살아남도록 하여 재조합 바이러스의 분리효율을 높이는 방법이 대표적인 방법으로 현재 판매되는 벡터계에서는 거의 도입되고 있다. 여기에 역시 표지 유전자를 도입하여 여러 단계로 재조합 바이러스의 순수분리가 용이하도록 제작되어있다.
또한 바이러스의 선발을 곤충 세포주가 아닌 박테리아에서 가능하도록 고안된 발현벡터계도 있다. 물론 이 경우에도 재조합 바이러스의 선발 이후에는 곤충 세포주나 유충에서 발현시켜야 한다.
그 외에 전이벡터를 없애고 직접 바이러스 DNA내의 목적하는 위치에 유용 유전자를 넣을 수 있는 벡터도 개발되어 있다.
기타 여러 가지 벡터가 개발되어 있으나 모두 특수한 목적에 의해 이용될 뿐 기본적으로는 위의 열거한 벡터 형태들에 속하는 것들이다.